Знаете ли вы, в чем самая большая разница между наукой и промышленностью? Нет, это не секретность в промышленности, это их преданность воспроизводимости. А для воспроизводимости необходимо делать все как можно более единообразно, следуя стандартным операционным процедурам от начала (создание сред) до конца (интерпретация ваших результатов). Эта статья будет посвящена тому, как наилучшим образом использовать среды.
Реагенты
Растворы и среды — краеугольные камни вашего эксперимента. Вы не получите воспроизводимости, если не будете строго контролировать их состав.
Для начала важно использовать реагенты:
- максимально приближены к 100% чистоте
- с одинаковым количеством примесей
- имеют номера партий (лоты)
Ведение журнала серийных номеров реагентов кажется занудством, но это очень полезно, когда вы понимаете, что ваш эксперимент не сработал из-за плохой партии реагентов, а не из-за вас! Более того, эксперимент может быть невоспроизводимым просто потому, что вы использовали реагент с другим номером партии, в котором было на 0,001% больше марганца. Правдивая история: Вся наша лаборатория однажды столкнулась с проблемой выращивания дрожжей из-за определенной партии дрожжевой азотной основы (смеси солей) с этой проблемой.
Осведомленность о различиях от партии к партии становится еще более важной для биологических веществ, таких как антитела. В зависимости от животных, использовавшихся для разработки данного антитела, сродство и титр антител будут меняться, даже если протокол иммунизации был точно таким же. Так что будьте осторожны и внимательны!
Однако могут быть моменты, когда работа с различными партиями реагентов неизбежна, например, когда необходимо либо заказать новую партию реагентов, либо полностью поменять поставщика. В этом случае не забудьте протестировать реагент в различных условиях в нескольких различных экспериментах, так как любые проблемы, связанные с реагентами, могут проявиться только в конкретном эксперименте.
Взвешивание
Количество реагента, указанное в составе реагента или средстве, не является приблизительным, а является точным количеством, которое необходимо взвесить и использовать. Вот руководство по взвешиванию реагентов.
Взвесьте необходимый реагент в пределах не более 10% от необходимого количества. Чем меньше количество используемого реагента, тем более точным будет вес, который вы должны использовать. Обычные электронные весы следует использовать для взвешивания килограммов и граммов, в то время как прецизионные весы следует использовать для взвешивания миллиграммов.
Используйте корытца для взвешивания, чтобы предотвратить проливание и слипание реагента. Чем меньше нужно взвешивать, тем меньше должен быть размер корытца для уменьшения потери реагентов.
Если вы пролили реагент, повторите взвешивание того количества, которое все еще присутствует в корытце, и добавьте по мере необходимости.
Реагенты, которые должны быть в растворе, следует добавлять в перемешиваемую жидкость объемом меньше конечного объема, так как объем может измениться по мере растворения реагента. Если вместо этого добавить сухой реагент в сосуд и затем добавить жидкость, это может привести к тому, что часть реагента останется неразбавленной.
Подготовка
Хорошо знать основные химические свойства ваших реагентов. Некоторые из них растворяются только в горячей воде. Другие будут выделять энергию в виде тепла (например, NaOH), поэтому растворять их в горячей воде не только ненужно, но и опасно, так как вода может закипеть.
Для помощи биологическим системам при гомеостазе мы используем буферы, как в составе среды, так и в пробирке. Конкретные особенности буферов, такие как емкость буфера и рабочий диапазон температур, зависят от того, какой именно буфер вы используете. Поэтому нельзя заменить, например, трис (TRIS) в среде фосфатно-солевым PBS только потому, что в кладовой не осталось триса. Пожалуйста, следуйте инструкциям или отложите изготовление носителя до тех пор, пока не появится требуемый реагент.
Среды
При изготовлении носителя важно не игнорировать инструкции на упаковке. Если в инструкции сказано, что среду следует хранить при температуре 4°C и разбавить при комнатной температуре, то это именно то, что вы должны делать. Эти инструкции были кропотливо определены промышленными техниками и учеными, которым приходилось проводить скучные эксперименты, направленные на изучение результата при изменении температуры среды на 1 градус — таким образом, они знают, о чем говорят. Убедитесь, что их усилия не были напрасными.
То же самое можно сказать и о последовательности добавления реагентов. Если говорится о добавлении в экстракт бычьего сывороточного альбумина (BSA), нельзя делать наоборот, так как последовательность, в которой вы добавляете реагенты, может влиять на pH, осадки солей и т.д. Если вам не нравится делать что-либо без объяснения причин, найдите технические примечания на сайте компании. Обычно они с удовольствием объясняют, почему.
Следуйте инструкциям, воспроизводите шаги в той же последовательности, и вы значительно увеличите шансы на то, что ваш эксперимент будет работать раз за разом.
Добавить комментарий